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Terreni di coltura e metodi per la coltura di microrganismi
https://patents.google.com/patent/US201600...1?oq=MORGELLONS
US20160090571A1
stati Uniti

Applicazioni in tutto il mondo
2015 WO noi
Applicazione US14/871.544 eventi
2014-09-30
Priorità a US201462057712P
2015-09-30
Domanda presentata da Orior LLC
2015-09-30
Priorità a US14/871.544
2015-09-30
Assegnato a Orior, LLC
2016-03-31
Pubblicazione di US20160090571A1
Stato
Abbandonato

Quello che si rivendica è:
1 . Metodo per coltivare un microrganismo associato alla malattia di Morgellons, detto metodo comprendendo l'aggiunta del microrganismo a una soluzione comprendente ferro ferroso, zucchero e acqua.
2 . Il metodo dirivendicazione 1 in cui la crescita del microrganismo è principalmente sotto forma di cocco.
3 . Il metodo dirivendicazione 1 comprendente inoltre l'aggiunta di perossido di idrogeno alla soluzione.
4 . Il metodo dirivendicazione 3 in cui la crescita del microrganismo è forma di cocco con concomitante crescita filamentosa.
5 . Il metodo dirivendicazione 1 comprendendo inoltre l'esposizione della soluzione all'energia elettromagnetica a bassa frequenza.
6 . Il metodo dirivendicazione 1 comprendente inoltre l'aggiunta di aria compressa alla soluzione.
7 . Il metodo dirivendicazione 1 in cui il pH della soluzione viene mantenuto tra circa 3,5 e circa 5.
8 . Il metodo dirivendicazione 1 comprendente inoltre la valutazione della crescita del microrganismo tramite esame microscopico, densità della coltura, conversione del ferro ferroso in ferro ferrico, spettrofotometria infrarossa e/o reazioni chimiche qualitative.
9 . Composizione comprendente un microrganismo associato alla malattia di Morgellons in una soluzione comprendente ferro ferroso, zucchero e acqua.
10 . La composizione dirivendicare 9 in cui la soluzione comprende inoltre perossido di idrogeno.
11 . La composizione dirivendicare 9 in cui il pH della soluzione viene mantenuto tra circa 3,5 e circa 5.
12 . Metodo per coltivare un microrganismo associato alla malattia di Morgellons, detto metodo comprendendo l'aggiunta del microrganismo a un mezzo di crescita solido comprendente agar e ferro ferroso.
13 . Il metodo dirivendicare 12 in cui il mezzo di crescita solido comprende inoltre zucchero, brodo di patate o ferro ferroso mescolato con agar.
14 . Il metodo dirivendicazione 13 in cui la crescita del microrganismo è principalmente sotto forma di cocco.
15 . Il metodo dirivendicazione 13 in cui il mezzo di crescita solido comprende inoltre perossido di idrogeno.
16 . Il metodo dirivendica 15 in cui la crescita del microrganismo è forma di cocco con concomitante crescita filamentosa.
17 . Il metodo dirivendicare 12 in cui l'agar nel mezzo di crescita solido è nell'intervallo da circa 0,5 a 1,5% di soluzione.
18 . Il metodo dirivendicare 12 comprendente inoltre la valutazione della crescita del microrganismo tramite esame microscopico, densità della coltura, conversione del ferro ferroso in ferro ferrico, spettrofotometria infrarossa e/o reazioni chimiche qualitative.
19 . Composizione comprendente un microrganismo associato alla malattia di Morgellons in un terreno di crescita solido comprendente agar e ferro ferroso.
20 . La composizione dirivendicare 19 in cui il mezzo di crescita solido comprende inoltre zucchero.
21 . La composizione dirivendica 20 in cui il mezzo di crescita solido comprende inoltre perossido di idrogeno.
22 . La composizione dirivendicare 19 in cui l'agar nel mezzo di crescita solido è nell'intervallo da circa 0,5 a 1,5% di soluzione.
23 . Metodo per separare chimicamente proteine ​​e lipidi da un microrganismo associato alla malattia di Morgellons, detto metodo comprendendo:
a) coltivare il microrganismo secondo il metodo di uno qualsiasi dei affermazioni 1attraverso 8 ;
(b) preparare una soluzione comprendente il microrganismo e la bile;
(c) miscelazione della soluzione di bile e microorganismo della fase (b) con un solvente non polare;
(d) aggiungere un acido e un reagente colorante alla soluzione del passaggio (c);
(e) miscelare la bile, il microrganismo e la miscela acida della fase (d); e
(f) separare la soluzione del passaggio (e) in strati lipidici e proteici, in cui lo strato proteico è un precipitante sul fondo della soluzione e lo strato lipidico è nello strato o negli strati superiori della soluzione.
24 . Il metodo dirivendicare 23 comprendente inoltre l'isolamento di una o più proteine ​​dallo strato proteico della fase (f) mediante diluizione progressiva del precipitante estratto.
25 . Il metodo dirivendicare 24 comprendente inoltre la regolazione del pH del precipitante estratto da circa 3,5 a circa 5.
26 . Il metodo dirivendicare 23 comprendendo inoltre l'isolamento di uno o più lipidi dallo strato lipidico della fase (f) tramite separazione dello strato lipidico dallo strato proteico seguita dalla separazione dei lipidi nello strato lipidico da eventuali residui di microorganismi.
27 . Il metodo dirivendicare 26 in cui lo strato lipidico è separato dallo strato proteico tramite un imbuto separatore.
28 . Il metodo dirivendicare 27 in cui i lipidi nello strato lipidico sono separati dai residui di microrganismi mediante l'aggiunta di uno o più solventi non polari.
29 . Il metodo dirivendicare 27 in cui il solvente non polare è xilene.
30 . Un metodo per inibire la crescita di un microrganismo associato alla malattia di Morgellons, detto metodo comprendendo il contatto del microrganismo con un inibitore scelto dal gruppo costituito da un antiossidante di n-acetil cisteina, glutatione, vitamina C e citrato di sodio in modo che la crescita del microrganismo sia inibito.

RIFERIMENTO INCROCIATO ALLE APPLICAZIONI CORRELATE
[0001]
La presente domanda rivendica la priorità sulla domanda di brevetto provvisorio statunitense Ser. 62/057.712 intitolato "Metodi di coltura isolante e conservazione di un nuovo microrganismo e metodi di estrazione di lipidi e proteine ​​da essi", depositato il 30 settembre 2014, la cui descrizione è qui incorporata per riferimento nella sua interezza, come se fosse completamente qui esposto.
SFONDO
[0002]
1. Campo dell'invenzione
[0003]
Le forme di realizzazione della presente invenzione sono generalmente correlate a metodi per isolare, coltivare e preservare un microrganismo associato alla malattia o condizione di Morgellons. Più specificamente, le forme di realizzazione della presente invenzione riguardano la coltura di un microrganismo aggiungendo il microrganismo a una coltura coerente con la presente divulgazione nonché metodi per isolare lipidi e/o proteine ​​da questo microrganismo.
[0004]
2. Descrizione dell'Arte Correlata
[0005]
Un fenomeno più comunemente indicato come malattia di "Morgellons" è una condizione caratterizzata da una serie di vari sintomi dermatologici e neuropsichiatrici. Questi sintomi possono includere piaghe deturpanti e sensazioni di gattonare sopra e sotto la pelle. Alcuni individui che hanno la malattia descrivono sintomi insoliti come strane fibre che spuntano attraverso la loro pelle o simili. Le piaghe e le lesioni della pelle ricordano più da vicino i morsi di insetti o ragni che sono peggiorati dai graffi. La malattia può presentare fibre o materiali solidi che emergono dalle piaghe. Morgellons è anche caratterizzato da artralgia articolare, affaticamento, disturbi del sonno, alterazioni della vista, confusione mentale e perdita di memoria. I Morgellon possono causare estremo disagio; nei casi più gravi può portare ad ansia, depressione e suicidio.
[0006]
Non esiste una cura nota per la malattia di Morgellons. Gli sforzi nella ricerca e nella comprensione delle origini e della patologia della malattia di Morgellons sono in corso. L'eziologia di Morgellons è molto controversa. Le comunità scientifiche e mediche devono ancora confermare un agente causale. Attualmente non è noto se e quali agenti infettivi causino Morgellons, in particolare perché la malattia assomiglia e viene spesso confusa con la parassitosi delirante.
[0007]
Oltre alle fibre e ai materiali solidi, le piaghe della malattia di Morgellons sono state associate a strutture filamentose visibili costituite da proteine ​​e lipidi. La forma primaria di crescita di queste strutture filamentose è una guaina filamentosa incapsulante, che si ritiene sia costituita principalmente da cheratina o altre sostanze e potrebbe essere simile alla crescita fungina. L'interno della guaina è costituito da una struttura sub-micronica che è caratterizzata a volte come una struttura simile a spirochete/batterica o simile alla clamidia ed è definita come Batteri Cross-Domain (CDB) o Cross Domain Organis. I batteri cross-domain ("CDB") o gli organismi cross-domain vengono classificati come la forma più primitiva di crescita dalle strutture filamentose. Per comprendere ulteriormente la patologia della malattia di Morgellons, è vantaggioso studiare questi microrganismi in uno stato più purificato. Tuttavia, nonostante gli enormi sforzi di ricerca, sono ancora in via di sviluppo metodi per isolare, coltivare e preservare questi microrganismi o parti di essi in uno stato altamente puro.
[0008]
Pertanto, vi è la necessità di metodi per isolare, coltivare e preservare questi nuovi microrganismi o parti di essi in connessione con la malattia di Morgellons in uno stato altamente puro. Oltre alla malattia di Morgellons, mezzi di coltura e metodi secondo forme di realizzazione della presente divulgazione possono anche essere usati per curare o trattare anche varie altre condizioni mediche.
RIEPILOGO
[0009]
Le forme di realizzazione della presente divulgazione si riferiscono generalmente a mezzi di coltura e metodi per coltivare microrganismi, loro composizioni di microrganismi, metodi per isolare lipidi e/o proteine ​​dai microrganismi e metodi per inibire i microrganismi.
[0010]
Secondo forme di realizzazione della presente divulgazione, vengono forniti metodi per coltivare un microrganismo associato alla malattia di Morgellons, o simili. Alcuni metodi secondo forme di realizzazione della presente divulgazione possono includere l'aggiunta del microrganismo a una soluzione comprendente ferro ferroso, zucchero e acqua, o simili. In forme di realizzazione della presente divulgazione, viene divulgata una composizione che può includere un microrganismo associato alla malattia di Morgellons in una soluzione comprendente ferro ferroso, zucchero e acqua, o simili.
[0011]
In alcune forme di realizzazione della presente divulgazione, può essere fornito un metodo per coltivare un microrganismo associato alla malattia di Morgellons. Un metodo coerente con la presente divulgazione può includere l'aggiunta del microrganismo a un terreno di crescita solido comprendente agar e ferro ferroso. In forme di realizzazione della presente divulgazione, può essere fornita una composizione che include un microrganismo associato alla malattia di Morgellons in un mezzo di crescita solido comprendente agar e ferro ferroso, o simili.
[0012]
In alcune forme di realizzazione della presente divulgazione, possono essere forniti metodi per separare chimicamente proteine ​​e/o lipidi da un microrganismo associato alla malattia di Morgellons.
[0013]
In alcune forme di realizzazione della presente divulgazione, possono essere forniti metodi per inibire la crescita di un microrganismo associato alla malattia di Morgellons.
DESCRIZIONE DETTAGLIATA
[0014]
Resta inteso che le forme di realizzazione della presente invenzione non sono limitate alle particolari metodologie, protocolli e simili, qui descritti in quanto possono variare. Si deve anche comprendere che la terminologia qui usata è usata allo scopo di descrivere soltanto forme di realizzazione particolari e non intende limitare l'ambito della presente invenzione. Se non diversamente definito, tutti i termini tecnici e scientifici qui utilizzati hanno lo stesso significato comunemente inteso da un ordinario esperto del ramo a cui appartiene la presente invenzione.
[0015]
Sebbene il trattamento della malattia di Morgellons, o simili, sia discusso in tutto, i mezzi di coltura e i metodi descritti qui possono essere usati per trattare anche varie altre condizioni. I mezzi di coltura e i metodi qui descritti non intendono essere limitati allo scopo di trattare la malattia di Morgellons.
[0016]
Come qui utilizzato, il termine "microorganismo" intende comprendere qualsiasi cellula singola o organismo microscopico multicellulare. In particolare, il termine microrganismo comprenderà tutti i procarioti, cioè i batteri e gli archei; e varie forme di eucarioti, comprendenti protozoi, funghi, alghe, piante microscopiche (ad es. alghe verdi) e animali come rotiferi e planari. Inoltre, questo termine può estendersi ad altri parassiti inclusi i nematodi. Questo termine intende anche includere i batteri tra domini (CDB) o organismi tra domini.
[0017]
La malattia o condizione di Morgellons, come qui utilizzata, è un disturbo inspiegabile che può essere caratterizzato da piaghe deturpanti e sensazioni di gattonare sopra e sotto la pelle. La malattia di Morgellons può presentare fibre o materiali solidi che emergono da queste piaghe. I malati possono avere lesioni cutanee che ricordano molto da vicino i morsi di insetti o ragni che sono peggiorate dai graffi. I siti più comunemente colpiti sono gli avambracci, la schiena, il torace, il viso, il cuoio capelluto e la parte inferiore delle gambe. Alcune delle lesioni possono essere infettate da germi che si trovano comunemente sulla pelle, ma queste infezioni potrebbero non essere la causa delle lesioni. I ricercatori dei Centers for Disease Control ("CDC") degli Stati Uniti hanno studiato campioni di pelle, sangue, urina e capelli, ma non hanno trovato prove che la malattia di Morgellons sia causata da un agente infettivo o da una sostanza nell'ambiente. I ricercatori non sono stati in grado di determinare se la malattia di Morgellons sia un nuovo disturbo o una forma di parassitosi delirante. Forme di realizzazione della presente invenzione possono includere metodi per isolare, coltivare e preservare il microrganismo allo scopo di trattare o curare la malattia di Morgellons, o simili.
[0018]
In accordo con le forme di realizzazione esemplificative qui presenti, è stato isolato e caratterizzato un microrganismo (che può essere indicato come il "complesso di Orior") che può essere associato alla malattia di Morgellons. Per "associato alla malattia o condizione di Morgellons", come qui usato, si intende che questo microrganismo può comprendere forme di crescita successive e visibili, specialmente quelle di natura filamentosa. La forma più primitiva di crescita di questo microrganismo è sub-micron, coccus e simil-batterica. La forma più primitiva di crescita può essere definita come un batterio incrociato ("CDB") a causa dei suoi peculiari modelli di crescita che sembrano incrociare i domini tradizionali della biologia, vale a dire gli Archaea, i batteri e gli Eukarya o ecdysozoa.
[0019]
La natura generale del microrganismo nella fase iniziale della crescita sembra essere parallela a quella dei batteri acidofili che producono filamenti gram-negativi ossidanti il ​​ferro ferroso. Potrebbe essere la più piccola unità di questo organismo in grado di crescere e riprodursi. La dimensione generale del microrganismo varia tra 0,5 e 1,0 micron, o una media di 0,6-0,8 micron. Man mano che cresce la sua morfologia cambia in struttura più filamentosa e talvolta spirocheta. Attraverso una crescita riuscita dal microrganismo, è stato osservato che la struttura formata dal cocco aveva proteine ​​​​e lipidi presenti.
[0020]
I lipidi e le proteine ​​presenti nel microrganismo sono stati estratti utilizzando i metodi qui descritti. Per estrarre lipidi e proteine, il microrganismo è stato prima isolato, coltivato e conservato in uno stato purificato. Vengono qui descritti metodi per isolare e coltivare questo microrganismo in uno stato altamente purificato in mezzi liquidi o solidi, che consentono la conservazione inerte a lungo termine dell'organismo. Il processo di coltura può essere scalabile e se necessario possono essere coltivate grandi quantità dell'organismo purificato allo stato primitivo. Vengono qui descritti anche metodi per isolare chimicamente ed estrarre lipidi e proteine ​​dal microrganismo coltivato.
[0021]
Si ritiene che questo microrganismo sia ampiamente distribuito nell'ambiente generale ed è stato identificato e isolato in una varietà di campioni. Questi campioni includono, ad esempio, campioni biologici umani (filamenti cutanei, sangue, urina, filamenti orali, produzione di biofilm), organi animali, piante coltivate, fonti di cibo e altri campioni ambientali. Il microrganismo può essere isolato mediante esame microscopico di campioni fisici. Il livello di ingrandimento richiesto per determinare in modo affidabile l'esistenza dell'organismo è di circa 3000× a 5000×. Una conferma dell'identificazione dell'organismo può essere effettuata con l'analisi spettroscopica a infrarossi di campioni fisici e colture sviluppate dall'organismo.
[0022]
È stata completata un'analisi qualitativa e analitica di alcuni lipidi estratti dal microrganismo. I lipidi sono una molecola biologica primaria all'interno di qualsiasi organismo vivente. Sono state identificate diverse caratteristiche principali ei risultati portano alla ribalta ulteriori proprietà insolite del microrganismo rispetto alla sua associazione con la malattia o la condizione di Morgellons. Alcune caratteristiche o fattori che sono stati identificati nel corso degli studi condotti includono: (1) i lipidi del microrganismo sembrano essere di natura altamente non polare; (2) i lipidi hanno un indice di rifrazione relativamente alto; (3) i lipidi sembrano essere composti, principalmente, da acidi grassi polinsaturi a lunga catena; (4) i lipidi sembrano supportare la combustione (cioè l'ossidazione) con facilità; (5) i lipidi sembrano reagire prontamente con gli alogeni, come lo iodio; (6) lo spettro della luce visibile della reazione lipide-iodio è unico e serve come ulteriore mezzo di identificazione e l'assorbanza di picco della reazione è a circa 498 nanometri; (7) si prevede che una parte significativa dei lipidi estratti provenga dalle membrane del microrganismo; e (8) possono esistere endotossine all'interno del microrganismo, per citarne alcune.
[0023]
La polarità può essere una proprietà che definisce una struttura molecolare ed è una misura della distribuzione delle cariche all'interno di una molecola. Le molecole non polari sono generalmente simmetriche nella loro natura con una tendenza verso una distribuzione uguale e simmetrica delle cariche. Le molecole polari, al contrario, sono solitamente di natura asimmetrica con le cariche sulla molecola distribuite in modo non uniforme. Le informazioni sulla polarità, quindi, forniscono una natura generalizzata per quanto riguarda la forma o la natura della molecola o della sostanza oggetto di studio.
[0024]
Gli acidi grassi sono un componente dominante di molti lipidi. Sono costituiti da un gruppo carbossilico attaccato a una catena idrocarburica. La lunghezza di questa catena può variare a seconda del particolare acido grasso coinvolto. Il gruppo carbossilico è di natura polare e quindi la distribuzione di carica su quel particolare gruppo funzionale è asimmetrica. Anche il gruppo carbossilico è di natura acida e questa è l'origine del nome degli acidi grassi che è legato a questa comune struttura lipidica.
[0025]
La catena idrocarburica che è attaccata al gruppo carbossilico è generalmente di natura non polare e serve a contrastare l'effetto polare del gruppo carbossilico. Pertanto, più il lipide è non polare, più è probabile che l'idrocarburo sia di lunghezza relativa maggiore. Una catena idrocarburica molto lunga (non polare) tenderà a dominare il carattere della molecola in questo caso e alla fine renderà la molecola meno polare.
[0026]
Questa relazione tra la polarità e la lunghezza della catena idrocarburica attaccata fornisce un'interpretazione della struttura della molecola lipidica. Alcuni lipidi sono più o meno polari di altri; un lipide altamente polare è indicativo di lunghe catene di idrocarburi all'interno dell'acido grasso. Più lungo è l'acido grasso, più è probabile che sia complessa la struttura lipidica o le interazioni con altre molecole. La struttura di qualsiasi molecola è importante, poiché la struttura può determinare la funzione.
[0027]
Negli studi di polarità del microrganismo, i lipidi sono stati miscelati con un solvente leggermente polare in una provetta. Dopo l'insediamento è rimasta una netta separazione. Al contrario, i lipidi si dissolvono molto più facilmente in una soluzione altamente polare. La conclusione specifica in questo caso potrebbe essere una forma lipidica che contiene catene di idrocarburi piuttosto estese.
[0028]
Un indice di rifrazione è una misura della capacità di una sostanza di piegare un'onda luminosa che la attraversa. È anche una misura della velocità della luce attraverso lo stesso materiale. È anche un'importante proprietà fisica che definisce una sostanza e la sua misurazione può essere effettuata con relativa facilità e con un costo modesto. Tabelle dell'indice di rifrazione per un'ampia varietà di sostanze, inclusi lipidi e oli sono facilmente disponibili per scopi di confronto.
[0029]
L'indice di rifrazione per i lipidi del microrganismo in esame misurato a 1.487 come media tra due diversi campioni. Lo strumento è stato calibrato con numerosi campioni di olio di confronto e ha funzionato in modo accurato e affidabile. L'errore stimato della misurazione era +/-0.001. La misura di 1.487 è un indice di rifrazione relativamente alto, soprattutto per quanto riguarda gli oli. Questa misurazione più elevata porta anche a interpretazioni significative.
[0030]
Ad esempio, esiste una relazione tra l'indice di rifrazione e il grado o stato di saturazione all'interno di un acido grasso o lipide. La proprietà del livello di saturazione (cioè, saturo vs. insaturo) di un lipide si esprime in termini di tipi di legame all'interno della molecola, un ulteriore aspetto della struttura.
[0031]
Un grasso saturo è uno in cui esiste un complemento completo di atomi di idrogeno attaccati. Un grasso saturo contiene solo singoli legami tra gli atomi di carbonio. Un grasso insaturo, al contrario, ha legami doppi (o superiori) tra gli atomi di carbonio e di conseguenza ci saranno meno atomi di idrogeno attaccati. Inoltre, si può fare una distinzione tra grassi monoinsaturi e grassi polinsaturi. In sostanza, un grasso mono-saturo ha un singolo doppio legame di carbonio all'interno della catena idrocarburica e un grasso polinsaturo ha più di un doppio legame di carbonio all'interno della catena.
[0032]
Più si può capire sulla struttura di una molecola biologica, più ci avviciniamo alla comprensione del comportamento, dell'interazione e della funzione di quella struttura molecolare.
[0033]
Esiste anche una relazione tra il grado di saturazione in un grasso e il 'numero di iodio'. Il numero di iodio è una misura del livello di assorbimento dello iodio da parte dei grassi e questo numero può essere utilizzato a sua volta per dedurre il grado di saturazione da parte di quello stesso lipide o grasso. Il metodo può essere utilizzato per determinare la qualità dei grassi. Il grado di saturazione dei grassi può influenzare i tassi di deterioramento degli alimenti e, a sua volta, influisce sull'economia dell'industria alimentare. Questo è un esempio di un'applicazione di forme di realizzazione della presente divulgazione che si estendono oltre i trattamenti per la malattia di Morgellons, o simili.
[0034]
In questo studio è stata stabilita una relazione tra l'indice di rifrazione di un lipide del microrganismo e il numero di iodio di quello stesso lipide. Un aumento del numero di iodio è indicativo di un più alto livello di insaturazione e parallelamente è stato riscontrato che un indice di rifrazione più elevato è fortemente correlato con un numero di iodio più elevato. In definitiva, una stima del numero di iodio più elevato indicherà un livello più elevato di insaturazione all'interno del lipide.
[0035]
In questo studio sono stati studiati diversi tipi di lipidi e la correlazione tra l'indice di rifrazione era forte (r=0.92, n=13). L'accuratezza del rifrattometro in uso è stata inclusa come parte dello studio. Il risultato di questo lavoro è che ora esiste un metodo praticabile per stimare il livello di saturazione relativa da una misurazione diretta dell'indice di rifrazione del lipide in studio. L'applicazione del modello di regressione lineare all'indice di rifrazione misurato (1,487) fornisce una stima del valore di iodio pari a 218. Questa grandezza per il valore di iodio stimato è estremamente elevata ed è di per sé significativa.
[0036]
La conclusione a cui si deve giungere da questo valore di iodio è significativa. Questo studio indica che il carattere del lipide può essere di un lipide altamente polinsaturo. Questo risultato è corroborante con l'interpretazione di una catena di acidi grassi relativamente lunga all'interno della struttura lipidica. Queste due interpretazioni si sostengono a vicenda. Le catene di idrocarburi lipidici dovrebbero essere lunghe con diversi doppi legami di carbonio lungo la catena. Questo, a sua volta, influenza la struttura poiché i doppi legami provocano una curvatura nella catena idrocarburica. Diversi doppi legami migliorano ulteriormente questa caratteristica.
[0037]
Inoltre, è molto più probabile che i doppi legami all'interno di una catena di idrocarburi producano reazioni chimiche. I lipidi con un alto valore di iodio sono più soggetti all'ossidazione e quindi hanno una maggiore probabilità di irrancidire (guastarsi). I lipidi ad alto livello di iodio hanno anche maggiori probabilità di produrre radicali liberi. Infine, i lipidi altamente polinsaturi hanno maggiori probabilità di polimerizzare (cioè "plastificare"). Ciascuno di questi impatti può causare ulteriori danni al corpo.
[0038]
Ci sono molti rischi per la salute associati ai grassi polinsaturi. Gli antiossidanti svolgono un ruolo nella mitigazione dell'eccessiva ossidazione del corpo, che può essere rilevante nel miglioramento delle influenze dannose dei grassi polinsaturi. Gli alogeni possono avere un impatto sulla tiroide e sul metabolismo.
[0039]
Questo studio indica che i lipidi del microrganismo possono essere altamente soggetti al processo di ossidazione. Il carattere dei lipidi è alquanto insolito rispetto all'ossidazione e, del resto, alla combustione. I lipidi estratti si infiammano facilmente. Secondo forme di realizzazione esemplificative della presente divulgazione, un metodo prevede il posizionamento di una piccola quantità dei lipidi in un vetro da orologio con un piccolo pezzo di carta che funge da stoppino. I lipidi del microrganismo bruciano facilmente e costantemente in queste condizioni e il comportamento è in qualche modo simile all'olio per lampade.
[0040]
A causa della natura biologica e apparente polinsaturo dei lipidi, si potrebbe fare un confronto con l'olio di balena. Gli oli di pesce e l'olio di balena condividono molte proprietà interessanti dei grassi altamente polinsaturi. In questo studio, lo stoppino è rimasto alla fine della combustione, dimostrando che l'olio stesso è la fonte primaria di combustibile all'interno della combustione. Questo studio ha anche dimostrato un fallimento di uno qualsiasi degli altri lipidi o oli testati nel supportare la combustione diretta.
[0041]
La combustione va di pari passo con l'ossidazione; qualcosa che brucia si ossida. In questo studio, di tutti gli altri oli testati in condizioni simili (circa 8 varietà di diverso grado di insaturazione), solo i lipidi del microrganismo hanno mostrato una facilità di combustione. Insieme al più alto indice di rifrazione trovato all'interno del gruppo che è stato esaminato, la drammatica esposizione della combustione del campione dimostra ulteriormente che il lipide del microrganismo è altamente insaturo e quindi soggetto a un'eccessiva ossidazione. Questa scoperta conferma l'eccessiva ossidazione all'interno del corpo che si verifica in associazione con la malattia o la condizione di Morgellons.
[0042]
Questo studio indica inoltre che l'eccessiva ossidazione all'interno del corpo è uno dei risultati più probabili previsti con la malattia o condizione di Morgellons. Diversi metodi sono stati utilizzati per determinare l'eccessiva ossidazione da coinvolgere. Uno è stato l'osservazione della crescita della coltura, per cui lo ione Fe+2 viene convertito in Fe+3 durante il processo di crescita. Visibilmente questo è rappresentato da un cambiamento di colore da una soluzione verdastra (caratteristica di Fe+2) ad una soluzione color ruggine (caratteristica di Fe+3). Inoltre, il recupero di Fe+3 è avvenuto direttamente dalle colture. I dati di uno studio in cui circa una dozzina di membri del pubblico, un sottoinsieme dei quali ha affermato di essere gravemente colpito dalla condizione di Morgellons, le scansioni di immagini del sangue inviate per l'analisi sono anche indicative di una probabile relazione tra lo stato di ossidazione del sangue (come indicato dal colore e dall'analisi spettrale del colore) e la gravità dei sintomi di Morgellons riportati. In questo studio, le immagini del sangue scansionate sono state elaborate con un'analisi spettrale del colore tramite il software NIH.
[0043]
Ci sono almeno due forme primarie di lipidi nel corpo, una per l'immagazzinamento di energia all'interno delle cellule e un'altra all'interno delle membrane della cellula, dove agiscono per incapsulare e proteggere la cellula. I grassi saturi hanno maggiori probabilità di essere associati allo stoccaggio di energia all'interno della cellula e i grassi insaturi hanno maggiori probabilità di essere associati alle membrane di una cellula. I fosfolipidi sono un'importante classe di lipidi che si trovano all'interno delle membrane cellulari. Il grado di insaturazione all'interno dei fosfolipidi varia, con una o entrambe le code con doppi legami di carbonio (il sito di ossidazione).
[0044]
L'ossidazione dei lipidi è indicata come perossidazione lipidica ed è particolarmente incline a verificarsi con i lipidi polinsaturi, come in questo studio. I fosfolipidi (un doppio strato) sono un costituente principale delle membrane cellulari e l'ossidazione di questi lipidi successivamente provoca danni alla cellula. La perossidazione lipidica è essenzialmente il furto di elettroni dai lipidi nelle membrane e si verifica come reazione a catena dei radicali liberi. L'ossidazione si verifica quando c'è un'eccessiva disponibilità di radicali liberi, o specie reattive dell'ossigeno. Il punto di ossidazione sarà la posizione del doppio legame, che si verifica in una posizione all'interno della coda dell'acido grasso insaturo.
[0045]
Come qui mostrato, questi microrganismi contengono al loro interno un grasso altamente polinsaturo e/o acidi grassi, che si prevede si presentino all'interno delle membrane del microrganismo. Il microrganismo può quindi essere soggetto o provocare perossidazione lipidica in presenza di radicali liberi. Questo processo, una volta avviato, è una reazione a catena e termina solo in presenza di opportuni antiossidanti, come la Vitamina E, la glutatione perossidasi, la transferrina (che lega il ferro libero), gli enzimi (come la catalasi), oltre ad altri. Anche la vitamina C e la NAC (N-acetil cisteina che agisce come precursore del glutatione) possono essere efficaci antiossidanti.
[0046]
In questo studio è stata osservata una reazione con uno degli alogeni, in questo caso lo iodio. Analogamente al caso della combustione, i lipidi dei microrganismi in studio erano gli unici lipidi (di circa otto in confronto) che mostravano una reazione pronunciata, ritenuta unica e caratteristica, con lo iodio. Lo iodio reagisce con i lipidi e questa è la base stessa del metodo del "numero di iodio" utilizzato come misura del livello di insaturazione del lipide. In questo studio è stata osservata la formazione di un complesso di iodio di colore rosso vivo, che si presentava solo all'interno di questa particolare forma lipidica in relazione ai numerosi tipi di campioni con cui è stata confrontata. La reazione del complesso colorato non si è verificata in modo simile a nessun altro campione lipidico esaminato. La natura del complesso può essere di un complesso ferro-lipidi-iodio o metallo di transizione.
[0047]
Utilizzando la spettroscopia della luce visibile, si è concluso che il complesso colorato formato ha una struttura che contiene numerosi doppi legami di carbonio. La spettroscopia della luce visibile è fortemente dipendente da ciò che viene chiamato coniugazione; la coniugazione è una struttura molecolare che si basa sull'alternanza di legami di carbonio singoli e doppi. Maggiore è il grado di coniugazione, maggiore è la lunghezza d'onda del colore che verrà assorbito. È particolarmente probabile che i cromofori si formino con composti che coinvolgono i metalli di transizione, come il ferro. Il colore del complesso si presta bene alla spettrometria della luce visiva e a un diagramma spettrale della formazione del complesso di microrganismi.
[0048]
In questo studio, l'assorbanza di picco si è verificata a circa 498 nanometri. Questo esame spettrale del complesso lipido-iodio è un metodo di identificazione per stabilire la presenza o l'esistenza di questa particolare forma lipidica di microrganismi. L'identificazione di un complesso ferro-lipide-iodio è stata ulteriormente corroborata da test per la rilevazione del ferro utilizzando il reagente 1,10 fenantrolina in combinazione con i lipidi in una soluzione leggermente polare. Questi test sono risultati positivi per la presenza dello ione Fe+2 all'interno dei lipidi del microrganismo. Questa scoperta è stata in coincidenza con l'uso significativo di ferro Fe+2 e il metabolismo da parte del microrganismo.
[0049]
Un polimero è una struttura molecolare composta da molte unità più piccole che si ripetono. Possono essere sintetici o naturali e di solito hanno una grande massa molecolare rispetto a quella dell'unità strutturale di base. Lattice e polistirolo sono esempi sia di un polimero naturale che sintetico. L'architettura e la lunghezza delle catene polimeriche influenzano fortemente le proprietà fisiche del polimero, come elasticità, punto di fusione e solubilità, tra le altre.
[0050]
La ragione per cui la polimerizzazione è rilevante per questo studio è che i lipidi insaturi sono inclini alla polimerizzazione. Maggiore è il grado di insaturazione, maggiore è la probabilità che avvenga la polimerizzazione. Ciò è dovuto all'ossidazione ai doppi legami di carbonio. Un esempio familiare di polimerizzazione è l'uso di olio di lino. L'olio di lino è un lipide altamente insaturo che viene applicato ai mobili come rivestimento protettivo; questo è uno dei cosiddetti “oli essiccanti”. Quando questo tipo di olio si deteriora (o si ossida), formerà un rivestimento più duro e protettivo sulla superficie del legno. Questo è un eccellente esempio dell'ossidazione di un olio o lipide altamente insaturo che produce un polimero. Come accennato, i polimeri possono variare ampiamente nelle loro proprietà fisiche e le materie plastiche sono un eccellente esempio aggiuntivo di polimeri sintetici.
[0051]
Si ritiene che la probabilità di polimerizzazione per il complesso lipidico del microrganismo sia elevata, poiché tutte le caratteristiche prerequisite sono presenti. Può essere altamente insaturo e quindi soggetto ad ossidazione. Pertanto, i lipidi del microrganismo possono produrre polimeri che, in generale, potrebbero causare danni se interni al corpo.
[0052]
I test condotti sul microrganismo indicano che sono Gram-negativi. Un test Gram-negativo è importante per i batteri in quanto indica almeno tre caratteristiche importanti. Questi includono che le pareti cellulari sono ricche di lipidi rispetto ai batteri Gram-positivi; che il test negativo indica la presenza di lipopolisaccaridi (LPS) o endotossine all'interno della parete cellulare; e che i batteri sono probabilmente batteri patogeni e associati a endotossine. Una cellula Gram-negativa è ricca di lipidi, mentre una cellula Gram-positiva ha un contenuto lipidico molto più basso. Il contenuto lipidico della parete cellulare Gram-negativa è di circa il 20-30%, che è molto alto rispetto alla parete cellulare Gram-positiva.
[0053]
In questo studio, il volume relativamente elevato di lipidi estratti dal microrganismo supporta il risultato del test Gram-negativo.
[0054]
Nella cellula Gram-negativa, lo strato di peptidoglicano è circa il 5-20% in peso secco della parete cellulare; nella cellula Gram-positiva lo strato di peptidoglicano è circa il 50-90% della parete cellulare in peso secco. Il peptidoglicano, noto anche come mureina, è un polimero costituito da amminoacidi e zuccheri. I batteri Gram-negativi sono generalmente più resistenti agli antibiotici rispetto ai batteri Gram-negativi. In considerazione della terminologia cross-domain attualmente in uso, gli archaea possono essere sia Gram-negativi che Gram-positivi. Una differenza tra le due forme, al di là del relativo contenuto lipidico e dello strato di peptidoglicano, è la presenza di lipopolisaccaridi (LPS) sui batteri Gram-negativi. LPS, o endotossine, provocano una forte risposta immunitaria negli animali.
[0055]
Non esistono standard normativi per i livelli di endotossine nell'ambiente. Le endotossine sono associate ad aumento di peso, obesità, infezioni gengivali e dentali e diabete. Esiste un legame con la sindrome da affaticamento cronico, così come con l'aterosclerosi, lo stress ossidativo, le condizioni croniche, le malattie cardiovascolari e il morbo di Parkinson. La condizione delle endotossine nel sangue è indicata come endotossiemia. Molti dei suddetti sintomi sono riportati anche nella malattia o condizione di Morgellons; questa somiglianza può essere indicativa di un legame tra Morgellons ed endotossine.
[0056]
In questo studio è stata condotta un'indagine a infrarossi sulla natura dei lipidi estratti. Per questo progetto è stato utilizzato uno spettrofotometro IR ed è stato ottenuto uno spettro molto chiaro. Lo spettro infrarosso è dominato da picchi nella regione di 3400 cm-1, 2900-3050 cm-1, 2000-2100 cm-1, 1450-1650 cm-1 e nella regione di 700 cm-1. I gruppi funzionali primari analizzati includevano alcani, alcheni, aromatici, alcoli e tiocianati. I fenoli polimerici e gli alcoli esistono come oggetto principale di indagine.
[0057]
Un'analisi dello spettro infrarosso dimostra che è fortemente dominato dalla combinazione e dalla presenza di gruppi funzionali carbonio-carbonio e carbonio-ossigeno a singolo e doppio legame. Tutte le valutazioni in questo studio sono altamente corroboranti l'una con l'altra e supportano la valutazione di un lipide altamente insaturo, e tutto ciò che ciò comporta, come comprendente una struttura centrale dell'estrazione del microrganismo che ha avuto luogo.
[0058]
Forme di realizzazione esemplificative della presente divulgazione forniscono un metodo o metodi per isolare e coltivare questo microrganismo in mezzi sia liquidi che solidi. In forme di realizzazione esemplificative, il microrganismo viene isolato e coltivato in uno stato altamente purificato. Per "altamente purificato" come qui utilizzato si intende che non vi è contaminazione visibile da parte di altri microrganismi. Alcuni di questi metodi consentono la conservazione inerte a lungo termine del microrganismo. I metodi dipendono dalla creazione di un ambiente di crescita altamente acido che includa un complesso di metalli di transizione con nutrienti specifici minimi aggiuntivi.
[0059]
Il processo di crescita può essere influenzato o potenziato con contributi aggiuntivi da iniezione di ossigeno e/o energie elettromagnetiche a corrente continua e alternata. Il metodo consente la sensibilità e/o l'inibizione del test di crescita sia in forma solida che liquida. Il processo di coltura è scalabile e se necessario possono essere coltivate grandi quantità dell'organismo purificato allo stato primitivo.
[0060]
In forme di realizzazione esemplificative, viene fornito un metodo per coltivare un microrganismo associato alla malattia di Morgellons che comprende l'aggiunta del microrganismo a una soluzione comprendente ferro ferroso, zucchero e acqua. In alcune forme di realizzazione, la crescita del microrganismo è principalmente sotto forma di cocco. In alcune forme di realizzazione, il metodo può anche includere l'aggiunta di perossido di idrogeno alla soluzione. In alcune forme di realizzazione, la crescita del microrganismo può includere la forma di cocco con concomitante crescita filamentosa. In forme di realizzazione esemplificative, il metodo può comprendere inoltre l'esposizione della soluzione a energia elettromagnetica a bassa frequenza e/o l'aggiunta di aria compressa alla soluzione. In alcune forme di realizzazione, il pH della soluzione viene mantenuto tra circa 3,5 e circa 5.
[0061]
In forme di realizzazione esemplificative, il metodo può anche comprendere la valutazione della crescita del microrganismo tramite esame microscopico, densità della coltura, conversione di ferro ferroso in ferro ferrico, spettrofotometria a infrarossi e/o reazioni chimiche qualitative.
[0062]
In alcune forme di realizzazione, viene fornita una composizione comprendente un microrganismo associato alla malattia di Morgellons in una soluzione comprendente ferro ferroso, zucchero e acqua. La soluzione può inoltre comprendere perossido di idrogeno e/o mantenere il pH della soluzione tra circa 3,5 e circa 5.
[0063]
In forme di realizzazione esemplificative, viene fornito un metodo per coltivare un microrganismo associato alla malattia di Morgellons che può includere l'aggiunta di un microrganismo a un mezzo di crescita solido comprendente agar e ferro ferroso. Il mezzo di crescita solido può inoltre comprendere zucchero, brodo di patate, ferro ferroso mescolato con agar e/o simili. La crescita del microrganismo è principalmente forma di cocco. In alcune forme di realizzazione, il mezzo di crescita solido può comprendere inoltre perossido di idrogeno. In alcune forme di realizzazione, la crescita del microrganismo può essere sotto forma di cocco con concomitante crescita filamentosa, o simili. In alcune forme di realizzazione, l'agar nel mezzo di crescita solido può essere nell'intervallo da circa 0,5 a 1,5% di soluzione. In alcune forme di realizzazione, il metodo può comprendere inoltre la valutazione della crescita del microrganismo tramite esame microscopico, densità della coltura,
[0064]
In alcune forme di realizzazione, viene fornita una composizione comprendente un microrganismo associato alla malattia di Morgellons in un mezzo di crescita solido comprendente agar e ferro ferroso. Il mezzo di crescita solido può inoltre comprendere zucchero. In alcune forme di realizzazione, il mezzo di crescita solido può comprendere inoltre perossido di idrogeno. In alcune forme di realizzazione, l'agar nel mezzo di crescita solido è nell'intervallo da circa 0,5 a 1,5% di soluzione.
[0065]
Le colture liquide e solide, quando cresciute nelle condizioni identificate qui descritte, sono altamente impermeabili alla contaminazione da altre forme di crescita. Le colture liquide e solide sono suscettibili di inibizione e test di sensibilità. L'acidità dell'ambiente di crescita è un fattore importante per ottenere una crescita di successo. Tuttavia, l'acidità da sola non è l'unica variabile che produce la crescita incontaminata e produttiva.
[0066]
In alcune forme di realizzazione, il test di sensibilità ai farmaci può essere supportato attraverso il monitoraggio delle zone di inibizione quando viene utilizzato il formato di agar. Pertanto, i test di sensibilità individuale possono essere eseguiti utilizzando questo formato per determinare il miglior trattamento clinico per i singoli pazienti. Questo può anche essere fatto in serie per determinare quando è stata controllata l'eliminazione dell'organismo e se è necessario modificare i regimi terapeutici in risposta alla resistenza emergente. Diversi antibiotici e agenti antifungini sono stati sottoposti a screening utilizzando questo metodo, nessuno dei quali ha dimostrato un effetto inibitorio visibile sulla crescita. In particolare, l'aggiunta di penicillina, ampicillina, eritromicina, neomicina, tetraciclina o ciprofloxacina alla soluzione non ha avuto effetti inibitori sulla crescita dell'organismo. In altri studi, Itraconazolo e Posaconazolo sono stati aggiunti ciascuno al terreno di coltura seguito dall'organismo. Nessuno dei due agenti antifungini ha dimostrato di inibire la crescita
[0067]
Secondo forme di realizzazione esemplificative, viene fornito un metodo per separare chimicamente proteine ​​e lipidi da un microrganismo associato alla malattia di Morgellons. Un metodo può comprendere la coltura del microrganismo secondo i metodi qui divulgati; preparare una soluzione comprendente il microrganismo e la bile; miscelazione della soluzione di bile e microrganismi con un solvente non polare; aggiungere un acido e un reagente colorante alla soluzione; (e) miscelare la bile, il microrganismo e la miscela acida; e (f) separare la soluzione in strati lipidici e proteici. Dopo la separazione, lo strato proteico è un precipitante sul fondo della soluzione e lo strato lipidico si trova nello strato o negli strati superiori della soluzione.
[0068]
In alcune forme di realizzazione, il metodo può comprendere inoltre l'isolamento di una o più proteine ​​dallo strato proteico tramite diluizione progressiva del precipitante estratto. In alcune forme di realizzazione, il metodo può comprendere la regolazione del pH del precipitante estratto da circa 3,5 a circa 5.
[0069]
In forme di realizzazione esemplificative, il metodo può comprendere inoltre l'isolamento di uno o più lipidi dallo strato lipidico tramite separazione dello strato lipidico dallo strato proteico seguita dalla separazione dei lipidi nello strato lipidico da eventuali residui di microorganismi. Uno strato lipidico può essere separato dallo strato proteico tramite un imbuto separatore.
[0070]
In alcune forme di realizzazione, i lipidi nello strato lipidico possono essere separati da qualsiasi residuo di microorganismi mediante l'aggiunta di uno o più solventi non polari, ad esempio xilene o simili. In alcune forme di realizzazione, un metodo per inibire la crescita di un microrganismo associato alla malattia di Morgellons può includere il contatto del microrganismo con un inibitore in modo da inibire la crescita del microrganismo. Esempi di inibitori includono, ma non sono limitati a, antiossidanti di n-acetil cisteina, glutatione, vitamina C e citrato di sodio.
[0071]
I seguenti esempi non limitativi sono forniti per illustrare ulteriormente forme di realizzazione della presente invenzione.
ESEMPI
Esempio 1
Metodi di coltura
[0072]
Il microrganismo può essere coltivato in una varietà di terreni sia in forma liquida che solida. La forma solida della crescita sembra favorire sia la crescita primitiva che la successiva produzione di filamenti, mentre la forma liquida sembra enfatizzare la crescita sub-micronica del cocco
[0073]
Una forma di realizzazione presenta un ambiente liquido che comprende una miscela di acqua pura; una soluzione fertilizzante commerciale del complesso di metalli di transizione chelati (Ferri-Lome Liquid Iron) che è dominata dalla presenza di ferro ferroso, che include anche altri metalli in piccole quantità, come rame, manganese e zinco; fruttosio; sale; aria compressa indotta nella soluzione; incubazione con calore moderato a circa 80-120° F., e una combinazione di energia elettromagnetica a frequenza molto bassa (VLF) ed estremamente bassa (ELF) indotta nella soluzione. Un'ulteriore forma di realizzazione dell'invenzione include un ambiente liquido comprendente quanto segue: 500-1500 ml di acqua pura; 15-45 ml soluzione fertilizzante commerciale chelata complesso di metalli di transizione (ferti-lomé liquido ferro) che è dominato dalla presenza di ferro ferroso, e comprende anche altri metalli in piccole quantità, come rame, manganese e zinco; 10-30 ml di fruttosio; 0,75-2,25 ml di sale; aria compressa indotta nella soluzione; incubazione con calore moderato a circa 80-120° F. e una combinazione di energia elettromagnetica a frequenza molto bassa (VLF) e a frequenza estremamente bassa (ELF) indotta nella soluzione. In ancora un'altra forma di realizzazione, l'ambiente liquido comprende una miscela di 1000 mi di acqua pura; 30 ml di una soluzione fertilizzante commerciale del complesso chelato di metalli di transizione (Ferro liquido Ferti-Lome) che è dominata dalla presenza di ferro ferroso e include anche altri metalli in piccole quantità, come rame, manganese e zinco; 20 ml di fruttosio; 1,5 ml di sale; aria compressa indotta nella soluzione; incubazione con calore moderato a circa 80-120° F., e una combinazione di energia elettromagnetica a frequenza molto bassa (VLF) e a frequenza estremamente bassa (ELF) indotta nella soluzione. L'energia elettromagnetica (ELF-VLF) può influenzare la crescita della coltura, ma potrebbe anche non essere necessaria affinché avvenga una crescita sufficiente o sostanziale. Sia l'ossigeno che le aggiunte di energia elettromagnetica possono comprendere "miglioramenti variabili" o simili.
[0074]
Ci sono numerose variazioni sulla combinazione di cui sopra che possono anche avere un discreto successo con la crescita. Ad esempio, una soluzione di ferro ferroso (solfato di ferro) può essere utilizzata da sola con acqua e si può produrre crescita. In condizioni assolutamente minimaliste, la crescita è stata osservata nei soli campioni di acqua con un tempo sufficiente. I fattori aggiuntivi, come l'ossigeno e le variabili di energia elettromagnetica, sopra elencati sembrano aumentare la produzione di crescita, ma potrebbero non essere necessariamente necessari. In ancora un'altra ulteriore forma di realizzazione, brodo di patate può essere aggiunto alla coltura, specialmente in combinazione con ferro ferroso. Il microrganismo sembra crescere più favorevolmente in un ambiente acido, specialmente in combinazione con fonti di ferro ferroso. Il pH ottimale per la crescita è attualmente valutato tra circa 3,5 e 5,0, ma è preferibile tra circa 4,5.
[0075]
Un'altra forma di realizzazione dell'invenzione presenta un terreno di crescita solido per sviluppare la crescita dal microrganismo comprendente agar (nell'intervallo di soluzione allo 0,5%-1,5%, preferibilmente come soluzione all'1%), brodo di patate, complesso commerciale di metalli di transizione chelati (Ferti-Lome ), fruttosio e sale. In un'ulteriore forma di realizzazione, il mezzo di crescita solido comprende 50-150 ml di agar (nell'intervallo 0,5%-1,5% di soluzione, preferibilmente come soluzione all'1%), 5-15 ml di brodo di patate, 2,5-7,5 ml di metallo di transizione chelato commerciale complesso (Ferti-Lome), 1,5-4,5 ml di fruttosio e 0,15-0,45 ml di sale. In ancora un'altra forma di realizzazione, il mezzo di crescita solido comprende 100 ml di agar (in una soluzione all'1%), 10 ml di brodo di patate, 5 ml di complesso commerciale di metallo di transizione chelato (Ferti-Lome), 3 ml di fruttosio e 0,3 ml di sale. Tale miscela viene quindi sottoposta a incubazione con calore moderato a un intervallo di 80-120° F.
[0076]
In un'altra forma di realizzazione, è stato dimostrato che non è richiesta l'incubazione della soluzione. L'aumento del calore, tuttavia, sembra aiutare a limitare la crescita alla forma "coccus". Ci sono due forme primarie di crescita che si sviluppano, cocco e filamentosa. Coccus si verifica sempre per primo, filamentoso può svilupparsi a seconda del terreno di coltura è. Una forma di realizzazione di un mezzo di crescita che si verifica a temperatura ambiente per la crescita della forma principalmente di cocco comprende il microrganismo, 30 mi di acqua, 0,10 grammi di solfato ferroso e 0,25 grammi di zucchero (lo zucchero da tavola o il fruttosio sono ugualmente efficaci). Una forma di realizzazione di un mezzo di crescita che si verifica a temperatura ambiente per la crescita della forma di cocco con successiva crescita filamentosa concomitante comprende il microrganismo, 30 ml di acqua, 0,10 grammi di solfato ferroso, 0,25 grammi di zucchero (zucchero da tavola,
[0077]
Dopo un periodo di incubazione e l'essere sottoposto alle condizioni e all'ambiente di cui sopra, l'organismo esisterà in uno stato primitivo in numero relativamente elevato e in forma purificata. Il microrganismo può essere ulteriormente isolato mediante separazione per gravità dalla soluzione del mezzo di crescita e successivamente risciacquato in acqua pura. Questo processo può essere ripetuto fino a quando in una soluzione acquosa rimane solo la crescita concentrata di microrganismi. Il microrganismo risulta inerte, conservabile e trasportabile a temperatura ambiente in queste condizioni finali di isolamento e purificazione per un periodo di tempo relativamente lungo (almeno alcune settimane). Anche una forma di stoccaggio essiccata si è dimostrata efficace nel sostenere la vitalità della crescita.
Esempio 2
Isolamento di proteine ​​e lipidi
[0078]
Altre forme di realizzazione dell'invenzione descrivono metodi per isolare chimicamente le proteine ​​da questo microrganismo, che possono includere un processo a più stadi che prevede l'uso di sali biliari, soluzioni alcaline, incubazione, solventi non polari, agitazione, acidificazione, separazioni per gravità, diluizione, l'aggiunta di un complesso di metalli di transizione, agenti alcalinizzanti aggiuntivi e/o precipitazione. La proteina risultante è chimicamente inerte e può essere conservata per tempi relativamente lunghi.
[0079]
Una forma di realizzazione dell'invenzione riguarda un metodo a più fasi per isolare chimicamente la proteina dal microrganismo e può comprendere, ad esempio:
1. Sviluppo della coltura di microrganismi;
2. Preparazione di una soluzione di microrganismi biliari comprendente:
un. 550 ml H 2 O riscaldata a circa 40° C.
B. 20ml. Bile di bue in polvere o sale biliare di bue equivalente (es. NutnCology Bile di bue 500 mg capsule);
C. 80 ml. microrganismo purificato, concentrato, stabilizzato per gravità all'interno dell'acqua; e
D. Idrossido di sodio (NaOH).
3. Miscelazione e miscelazione della soluzione di microrganismi biliari con un solvente non polare come lo xilene, in un alto livello di agitazione per circa cinque minuti:
4. L'aggiunta di un acido e di un reagente alla soluzione;
5. Miscelazione della miscela del complesso bile-microorganismo-acido sotto forte agitazione per circa cinque minuti; e
6. Separazione della soluzione negli strati lipidici e proteici, in cui lo strato proteico si trova sul fondo della soluzione e lo strato lipidico si trova nello strato o negli strati superiori della soluzione.

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Astratto
Vengono forniti metodi e terreni di coltura per la coltura di un microrganismo associato alla malattia di Morgellons. In forme di realizzazione esemplificative, vengono forniti metodi che possono includere l'aggiunta di un microrganismo associato alla malattia di Morgellons a una soluzione contenente ferro ferroso, zucchero e acqua o a un mezzo di crescita solido contenente agar e ferro ferroso. Sono anche fornite composizioni contenenti un microrganismo associato alla malattia di Morgellons, nonché metodi per isolare lipidi e proteine ​​da questo microrganismo e metodi per inibire la sua crescita.